GABA T-3CRISPR激活质粒(h): sc-403545-ACT

SLC6A11 编码人类 GABA 转运体 3（GAT-3）。GAT-3 是一种 Na⁺/Cl⁻ 依赖的膜转运蛋白，负责将细胞外空间中的 γ-氨基丁酸（GABA）清除，从而塑造抑制性神经传递。通过调控突触内及突触外 GABA 的可用性，GAT-3 会影响氯离子稳态、神经元兴奋性以及网络振荡，并在功能上与 GABA 旁路（GABA shunt）相耦联，将神经递质循环与细胞代谢连接起来。SLC6A11 的活性还与星形胶质细胞—神经元之间的代谢互作及相关转运过程相整合，从而精细调节神经递质再摄取与突触信号传导。在抑制性回路平衡受扰的神经精神与神经发育相关表型研究中，GABA 摄取失调以及 SLC6A11 表达改变一直是重要的考察方向。

GABA T-3 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC6A11的表达。

GABA T-3 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SLC6A11基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SLC6A11转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GABA T-3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SLC6A11位点，并能够研究内源性位点上依赖于GABA T-3的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC6A11表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GABA T-3通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。