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G3BP2CRISPR激活质粒(h) | sc-403630-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
G3BP2CRISPR激活质粒(h2) | sc-403630-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 G3BP2(G3BP 应激颗粒组装因子 2)是一种 RNA 结合蛋白,作为细胞质应激颗粒的核心成核因子,在细胞应激过程中整合信号传导与 mRNA 代谢。它通过影响核糖核蛋白复合体的动态,以及与应激激活型激酶相关的通路相互作用,参与翻译调控、mRNA 稳定/降解和先天性应激反应。G3BP2 还通过协调影响细胞存活与对环境信号适应的 RNA-蛋白组装体,支持更广泛的转录后调控。G3BP2 表达失调及应激颗粒生物学异常与癌症相关表型和与神经退行性变相关的蛋白稳态(proteostasis)紊乱有关,因此是开展 RNA 颗粒机制研究的一个有用关键节点。
G3BP2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性G3BP2的表达。
G3BP2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的G3BP2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于G3BP2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性G3BP2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的G3BP2位点,并能够研究内源性位点上依赖于G3BP2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在G3BP2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟G3BP2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。