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FRS2CRISPR激活质粒(h) | sc-400656-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
FRS2(成纤维细胞生长因子受体底物2)是一种膜近端衔接蛋白,可将被激活的FGFR与下游信号级联相连接,包括RAS–MAPK/ERK和PI3K–AKT通路。FRS2通过其PTB结构域以及多个酪氨酸磷酸化位点,协调招募GRB2/SOS和GAB1,从而传递促有丝分裂与细胞存活信号,进而影响细胞增殖、分化和迁移。由FRS2介导的信号传导是FGF配体驱动的发育与组织稳态程序的关键环节;而FGFR–FRS2轴的异常活性也与肿瘤生物学中失调的生长信号有关。作为通路中的一个枢纽节点,FRS2常被用于研究受体酪氨酸激酶信号的整合、反馈调控以及与其他生长因子通路的串扰。
FRS2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FRS2的表达。
FRS2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的FRS2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于FRS2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性FRS2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的FRS2位点,并能够研究内源性位点上依赖于FRS2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FRS2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟FRS2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。