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FOXL2CRISPR激活质粒(h) | sc-403351-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
FOXL2 编码一种叉头(forkhead)家族转录因子,通过调控谱系特异性的基因表达程序,在卵巢发育和颗粒细胞身份维持中发挥核心作用。它通过与核受体信号通路及染色质相关调控因子的相互作用,调节控制类固醇生成、卵泡发生以及细胞周期平衡的转录网络。FOXL2 的活性有助于维持卵巢功能和细胞分化状态;而 FOXL2 依赖的转录调控失衡,则与生殖内分泌疾病及肿瘤相关的基因表达特征相关。作为 DNA 结合型调控因子,FOXL2 常被用于研究其对启动子/增强子占位、表观遗传状态以及情境依赖性的转录输出的影响。
FOXL2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FOXL2的表达。
FOXL2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的FOXL2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于FOXL2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性FOXL2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的FOXL2位点,并能够研究内源性位点上依赖于FOXL2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FOXL2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟FOXL2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。