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Filamin 2CRISPR激活质粒(h) | sc-402358-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 FLNC 基因编码丝状蛋白 2(filamin 2),这是一种与肌动蛋白结合的细胞骨架支架蛋白,可交联 F-肌动蛋白,并将皮层细胞骨架与膜蛋白耦联,从而协调细胞形态、黏附与机械信号转导。丝状蛋白 2 参与黏着斑及整合素相关信号传递,影响细胞骨架重塑、细胞迁移以及在肌肉和其他承受机械应力组织中的力传递。依赖 FLNC 的网络与调控肌节完整性和应激反应的通路相互衔接,将细胞骨架组织与细胞稳态联系起来。FLNC 的遗传破坏或表达失衡与心肌病和骨骼肌肌病相关,支持其在肌肉生物学与疾病机制研究中的重要性。
Filamin 2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FLNC的表达。
Filamin 2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的FLNC基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于FLNC转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Filamin 2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的FLNC位点,并能够研究内源性位点上依赖于Filamin 2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FLNC表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Filamin 2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。