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ferritin heavy chainCRISPR激活质粒(h) | sc-418152-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
ferritin heavy chainCRISPR激活质粒(h2) | sc-418152-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
FTH1 编码铁蛋白重链(ferritin heavy chain),是铁蛋白复合体中具有亚铁氧化酶活性的亚基,可将 Fe2+ 氧化为 Fe3+ 并促进铁的储存,从而减少游离铁(labile iron)水平及铁催化的氧化损伤。通过缓冲细胞内铁水平,FTH1 影响氧化还原稳态、线粒体代谢,以及铁反应元件/铁调控蛋白(IRE/IRP)网络;该网络协调铁的摄取、利用与储存。铁蛋白重链还可通过调控铁的可利用性,参与应激反应程序以及铁依赖性的细胞死亡通路(如铁死亡,ferroptosis)。FTH1 表达或铁蛋白功能失调与氧化应激应答异常及铁代谢管理紊乱相关,这些现象广泛见于肿瘤生物学、神经退行性疾病和炎症性疾病等领域。
ferritin heavy chain CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FTH1的表达。
ferritin heavy chain CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的FTH1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于FTH1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ferritin heavy chain表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的FTH1位点,并能够研究内源性位点上依赖于ferritin heavy chain的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FTH1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ferritin heavy chain通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。