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FAT10慢病毒激活颗粒(m) | sc-423986-LAC | 200 µl | CNY3422.00 | |||
FAT10慢病毒激活颗粒(m2) | sc-423986-LAC-2 | 200 µl | CNY3422.00 |
小鼠 Ubd 基因编码 FAT10(泛素 D),这是一种类泛素修饰因子,可与靶蛋白发生共价连接,从而促进其被 26S 蛋白酶体快速降解。FAT10 化(FAT10ylation)在很大程度上独立于经典的泛素链修饰,并与炎症信号、干扰素应答程序以及通过 MHC I 通路的抗原加工相关。Ubd/FAT10 的表达可被促炎性细胞因子诱导,并可通过改变蛋白稳定性来重塑蛋白质稳态、细胞周期调控和应激适应性反应。在实验模型中,FAT10 的失调与炎症状态及癌症相关表型有关,因此它是研究免疫-代谢串扰与蛋白酶体依赖性调控的一个有价值节点。
FAT10 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Ubd 表达。
FAT10 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Ubd转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性FAT10表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Ubd 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。