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Fascin 2CRISPR激活质粒(m) | sc-433603-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
Fascin 2CRISPR激活质粒(m2) | sc-433603-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
小鼠 Fscn2 编码 Fascin 2,这是一种肌动蛋白束化蛋白,能够组织平行的 F-肌动蛋白(F-actin)阵列,并支持膜突起形成、细胞形态维持以及细胞骨架稳定性。Fascin 家族蛋白参与肌动蛋白丝的重塑,该过程与黏附动力学及细胞运动相关机制相互衔接,从而将细胞骨架结构与力学信号转导和细胞极性组织联系起来。在感觉系统与上皮组织等情境中,Fascin 2 与特化的富含肌动蛋白结构相关,因此对于研究细胞骨架维护与组织完整性具有意义。肌动蛋白束化失调及 fascin 介导的重塑已在多种退行性与增殖性疾病模型中与细胞功能障碍相关,这也支持在小鼠系统中进一步探究 Fscn2 依赖的通路。
Fascin 2 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Fscn2的表达。
Fascin 2 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Fscn2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Fscn2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Fascin 2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Fscn2位点,并能够研究内源性位点上依赖于Fascin 2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Fscn2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Fascin 2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。