FAM20CCRISPR激活质粒(m): sc-429814-ACT
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- FAM20C CRISPER激活质粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- FAM20C CRISPR 激活质粒 (m)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 FAM20C CRISPR 激活质粒 (m) 和 FAM20C CRISPR 激活质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别针对 Fam20c 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
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FAM20CCRISPR激活质粒(m) | sc-429814-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
Fam20c 编码 FAM20C，这是一种分泌型并定位于高尔基体的非典型蛋白激酶，可在 Ser-x-Glu/pSer 基序上对细胞外蛋白进行磷酸化，从而塑造分泌通路的组成与功能。在小鼠中，FAM20C 介导的磷酸化调控细胞外基质蛋白、矿化相关因子以及分泌型信号组分，将高尔基体加工过程与组织发育和稳态维持联系起来。该活性与成骨及生物矿化程序相互交叉，而 FAM20C 功能异常与骨骼和牙齿基质组织结构缺陷相关。作为分泌性磷蛋白组的调控因子，FAM20C 与基质重塑、细胞—基质通讯以及依赖分泌的信号网络研究密切相关。
FAM20C CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Fam20c的表达。
FAM20C CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Fam20c基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Fam20c转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性FAM20C表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Fam20c位点，并能够研究内源性位点上依赖于FAM20C的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Fam20c表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟FAM20C通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。