FAM177A1CRISPR激活质粒(h2): sc-417161-ACT-2

人类FAM177A1（family with sequence similarity 177 member A1）基因编码一种尚未得到充分表征的蛋白质；基于表达谱与遗传关联数据，已有证据逐渐显示其与细胞稳态维持及免疫相关生物学过程存在联系。现有研究提示，FAM177A1可能通过影响细胞内运输以及相关信号程序来塑造炎症反应，因此对于研究先天免疫通路在不同情境下的调控机制具有意义。已有报道指出，FAM177A1的遗传变异或表达异常与复杂疾病表型相关，这也支持将其作为功能基因组学研究靶点，用于解析基因—环境互作及其下游转录调控网络。在人类细胞中对FAM177A1进行基因编辑，可用于开展通路连通性的机制研究、表型筛选，并验证影响免疫与应激反应过程的候选调控元件。

FAM177A1 CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FAM177A1的表达。

FAM177A1 CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的FAM177A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于FAM177A1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性FAM177A1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的FAM177A1位点，并能够研究内源性位点上依赖于FAM177A1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FAM177A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟FAM177A1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。