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FAM171A2CRISPR激活质粒(h) | sc-415352-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
FAM171A2(family with sequence similarity 171 member A2)编码一种表征不足的人类蛋白,预测与细胞膜相关。越来越多的证据表明,FAM171 家族与细胞—细胞相互作用以及细胞形态的调控有关。转录组数据提示其在神经谱系与上皮谱系中呈现依赖情境的表达,暗示 FAM171A2 参与与分化相关的程序以及组织特异性的信号状态。一些癌症研究与神经生物学相关研究报道了其表达模式的改变,支持将 FAM171A2 作为影响增殖、迁移或谱系身份的修饰因子进行进一步研究。由于机制性注释仍然有限,对内源性 FAM171A2 进行可控扰动有助于绘制通路连接关系并界定下游的转录响应。
FAM171A2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FAM171A2的表达。
FAM171A2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的FAM171A2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于FAM171A2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性FAM171A2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的FAM171A2位点,并能够研究内源性位点上依赖于FAM171A2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FAM171A2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟FAM171A2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。