Exo84CRISPR激活质粒(h): sc-403472-ACT

人类 EXOC8 基因编码 Exo84，它是八聚体外排复合体（exocyst）系链复合物的核心组分，负责在 SNARE 介导的膜融合之前，将分泌小泡引导至质膜上的特定位点。通过参与极性外排作用（polarized exocytosis），Exo84 支持多种过程，包括上皮极性的建立、神经突起生长、纤毛发生以及定向细胞迁移；同时它还与小 GTP 酶信号通路（例如 Ral 和 Rab 通路）相互衔接，从而协调小泡靶向与细胞骨架重塑。依赖 exocyst 的膜运输也会影响受体和转运蛋白在细胞表面的递送与回收，进而塑造信号输出和膜组成。exocyst 功能失调与癌症模型中细胞极性改变和侵袭性行为相关，也与神经元和上皮稳态缺陷有关，并可与发育异常及神经退行性表型相联系。

Exo84 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性EXOC8的表达。

Exo84 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的EXOC8基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于EXOC8转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Exo84表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的EXOC8位点，并能够研究内源性位点上依赖于Exo84的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在EXOC8表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Exo84通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。