Eps8CRISPR激活质粒(h): sc-403249-ACT

EPS8（Eps8）编码一种 EGFR 通路底物蛋白，可将受体酪氨酸激酶信号与肌动蛋白细胞骨架重塑整合起来。Eps8 常与 ABI1、SOS1 等衔接蛋白形成复合物，调控 Rac 的激活、细胞膜褶皱（membrane ruffling），并对丝状伪足（filopodia）和片状伪足（lamellipodia）的动态变化进行精细控制，从而把生长因子刺激与细胞形态和运动性联系起来。通过这些作用，Eps8 还影响包括内吞作用、黏附以及 EGFR/ERBB 网络下游的信号传递等过程。在多种与疾病相关的细胞情境中，EPS8 表达改变或其通路耦联异常与迁移失衡及增殖信号紊乱相关，因此是开展细胞骨架信号机制研究的有用靶点。

Eps8 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性EPS8的表达。

Eps8 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的EPS8基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于EPS8转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Eps8表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的EPS8位点，并能够研究内源性位点上依赖于Eps8的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在EPS8表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Eps8通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。