ephrin-A3CRISPR激活质粒(h): sc-402771-ACT

EFNA3 编码 ephrin-A3，这是一种通过糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定在细胞膜上的配体，可与 EphA 受体酪氨酸激酶结合并介导依赖细胞接触的细胞—细胞通讯。ephrin-A3/EphA 信号可调控细胞骨架重塑、细胞黏附与定向迁移，并通过包括 Rho 家族 GTP 酶和 MAPK 依赖性程序在内的通路影响组织边界形成、轴突导向以及血管形态建成。在哺乳动物系统中，ephrin–Eph 信号的异常已在多种疾病情境下与神经元连接性改变、血管生成性重塑以及侵袭性表型相关，因此 EFNA3 是研究微环境信号的一个有用节点。因而，人 EFNA3 的活性对于解析膜系留信号如何塑造分化、运动性与组织结构具有重要意义。

ephrin-A3 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性EFNA3的表达。

ephrin-A3 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的EFNA3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于EFNA3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ephrin-A3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的EFNA3位点，并能够研究内源性位点上依赖于ephrin-A3的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在EFNA3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ephrin-A3通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。