ephrin-A2CRISPR激活质粒(h): sc-403672-ACT

EFNA2 编码 ephrin‑A2，这是一种通过糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定在细胞膜上的配体，可与 Eph 受体酪氨酸激酶结合，在细胞—细胞接触条件下介导依赖接触的信号传递，从而参与细胞间通讯。Eph/ephrin 信号通过与 Rho 家族 GTP 酶、MAPK 信号及细胞骨架重塑相衔接的通路，调控轴突导向、神经回路组装、血管模式形成、上皮边界建立以及细胞迁移。EFNA2 表达改变或 EphA–ephrin‑A 信号平衡失调与黏附与运动能力异常相关，这些表型与神经发育过程及肿瘤生物学密切相关，包括肿瘤侵袭和血管生成重塑。作为一种固定于细胞表面的提示信号，ephrin‑A2 也常用于研究双向信号传导：表达配体的细胞与表达受体的细胞可分别触发不同的下游反应。

ephrin-A2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性EFNA2的表达。

ephrin-A2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的EFNA2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于EFNA2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ephrin-A2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的EFNA2位点，并能够研究内源性位点上依赖于ephrin-A2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在EFNA2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ephrin-A2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。