EnigmaCRISPR激活质粒(h): sc-403254-ACT

人类 PDLIM7 基因编码 Enigma，这是一种 PDZ–LIM 结构域适配蛋白，定位于肌动蛋白细胞骨架及与黏着斑相关的结构，将信号复合体连接到细胞骨架重塑过程。Enigma 通过在黏附结构和应力纤维网络中协调蛋白–蛋白相互作用，参与机械转导与细胞运动相关程序，并影响调控细胞结构与分化的信号通路。凭借其支架功能，PDLIM7 常在心肌与骨骼肌组织结构研究中被关注，在这些情境下，细胞骨架完整性与转录调控紧密耦联。文献报道，PDLIM7 的表达或定位失调与细胞迁移改变及组织重塑表型相关，涉及心血管与肿瘤发生相关的生物学过程。

Enigma CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PDLIM7的表达。

Enigma CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PDLIM7基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PDLIM7转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Enigma表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PDLIM7位点，并能够研究内源性位点上依赖于Enigma的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PDLIM7表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Enigma通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。