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EN1/Engrailed 1双切口酶质粒(h) | sc-405900-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EN1/Engrailed 1双切口酶质粒(h2) | sc-405900-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EN1(Engrailed 1)编码一种同源盒(homeobox)转录因子,通过调控参与细胞命运决定、分化及轴突导向的基因表达程序,来调节胚胎图式建立与神经发育。在人类细胞中,EN1 参与与 Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)和 SHH 等发育信号通路相交织的转录网络,从而影响区域身份确定与组织形态发生。在多种情境下,EN1 的表达失衡或表观遗传调控异常与谱系程序改变及肿瘤相关表型有关,因此它是研究发育程序再激活与细胞状态转换的一个有用节点。因而,EN1 常被用于神经发育、神经元维持以及与疾病相关的转录重编程模型研究。
EN1/Engrailed 1 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 EN1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对EN1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏EN1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了EN1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。