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ELL2CRISPR激活质粒(h) | sc-404784-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
ELL2(eleven-nineteen 富含赖氨酸的白血病相关基因 2)编码一种 RNA 聚合酶 II 的延伸因子,可通过减少转录停顿并促进有效延伸来提高转录的持续性(processivity)。作为超延伸复合体(super elongation complex)的功能伙伴,ELL2 有助于协调转录共时(co-transcriptional)的 RNA 加工过程,包括 mRNA 成熟,以及参与分化与应激反应中的受调控基因表达程序。在免疫相关背景下,ELL2 与浆细胞生物学和免疫球蛋白分泌相关,体现了其对高产出转录状态的影响。涉及 ELL2 的转录延伸失调与血液系统恶性肿瘤相关的转录程序以及更广泛的 RNA 合成通路紊乱有关。
ELL2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ELL2的表达。
ELL2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ELL2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ELL2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ELL2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ELL2位点,并能够研究内源性位点上依赖于ELL2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ELL2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ELL2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。