eEF2K Double Nickase Plasmid (h): sc-402166-NIC. Western blot analysis of eEF2K expression in non-transfected control (A) and eEF2K Double Nickase Plasmid transfected (B) HEK293T whole cell lysates. Blot probed with eEF2K (C-12): sc-390710. α-actinin (H-2): sc-17829 used as specificity and loading control.
eEF2K双切口酶质粒(h): sc-402166-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- eEF2K 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- eEF2K双切酶质粒（h）和eEF2K双切酶质粒（h2）编码针对EEF2K的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：eEF2K: sc-390710，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
eEF2K双切口酶质粒(h) | sc-402166-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
eEF2K双切口酶质粒(h2) | sc-402166-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
EEF2K 编码真核延伸因子 2 激酶（eEF2K）。eEF2K 是一种 Ca2+/钙调蛋白依赖性的丝氨酸/苏氨酸激酶，可通过磷酸化 eEF2 来减缓核糖体转位，并在细胞应激时抑制蛋白质合成。作为营养与能量感知网络（包括 mTOR 和 AMPK 信号通路）的下游效应因子，eEF2K 有助于将翻译调控与自噬及代谢适应相协调。该通路通过调节整体及选择性 mRNA 的翻译，影响细胞生长、生存以及突触可塑性。已有研究在与癌症相关的应激反应以及神经系统和代谢性疾病中观察到 eEF2K 活性和 eEF2 磷酸化的异常，提示其具有重要的机制研究价值。
eEF2K 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 EEF2K 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对EEF2K内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏EEF2K的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了EEF2K基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。