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EEDCRISPR激活质粒(h) | sc-401234-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
EEDCRISPR激活质粒(h2) | sc-401234-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
EED(embryonic ectoderm development,胚胎外胚层发育基因)编码多梳抑制复合体2(PRC2)的核心组分之一。它可与H3K27me3结合,并通过变构作用增强EZH2/EZH1甲基转移酶活性,从而强化兼性异染色质并维持稳定的转录沉默。通过PRC2依赖的表观遗传调控,EED通过协调染色质压缩及抑制发育调控因子,参与谱系决定、细胞周期控制以及细胞身份的维持。EED–PRC2功能失调与多种情境下H3K27甲基化图谱的广泛改变、异常基因表达程序以及致癌或发育异常表型相关。因此,EED常被用于染色质生物学研究、分化模型以及多梳介导基因抑制的通路层面分析。
EED CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性EED的表达。
EED CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的EED基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于EED转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性EED表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的EED位点,并能够研究内源性位点上依赖于EED的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在EED表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟EED通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。