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Ect2CRISPR激活质粒(h) | sc-401538-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 ECT2 基因编码上皮细胞转化因子 2(Ect2),它是一种 Rho 鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF),可激活 RhoA、Rac1 和 Cdc42,从而协调肌动蛋白重塑与细胞质分裂。Ect2 在细胞周期过程中受到动态调控,并定位于细胞核及有丝分裂相关结构,以控制分裂沟形成、纺锤体相关信号传导以及上皮极性的维持。通过 Rho GTP 酶信号通路,Ect2 影响细胞迁移、黏附和增殖等过程,这些过程与调控基因组稳定性和有丝分裂保真性的通路相互交织。ECT2 的表达或活性失调与致癌性转化表型相关,并常在肿瘤细胞侵袭和异常细胞分裂的研究背景下被重点关注。
Ect2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ECT2的表达。
Ect2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ECT2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ECT2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Ect2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ECT2位点,并能够研究内源性位点上依赖于Ect2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ECT2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Ect2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。