E6BPCRISPR激活质粒(h): sc-409673-ACT

RCN2 编码人类 E6 结合蛋白（E6BP），这是一种定位于内质网的钙结合蛋白，参与分泌通路稳态的维持。E6BP 有助于内质网腔内钙依赖性的蛋白折叠与质量控制，因此与内质网应激信号以及蛋白质稳态（proteostasis）相关过程相联系。通过这些功能，RCN2 与细胞调控运输、分泌以及应激适应性转录程序的反应密切相关。内质网蛋白质稳态与钙稳态的异常常与疾病相关表型相伴出现，使 RCN2 成为研究应激信号与分泌生物学机制的有用靶点。

E6BP CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性RCN2的表达。

E6BP CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的RCN2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于RCN2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性E6BP表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的RCN2位点，并能够研究内源性位点上依赖于E6BP的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在RCN2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟E6BP通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。