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DUSP8CRISPR激活质粒(h) | sc-404385-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
双特异性蛋白磷酸酶8(DUSP8)是一种MAP激酶磷酸酶,可去磷酸化已激活的MAPK,并在通过JNK和p38 MAPK通路介导的应激反应信号中发挥重要的调控作用。DUSP8通过调节MAPK磷酸化的幅度与持续时间,影响控制细胞增殖、凋亡、分化及炎症反应的转录程序。DUSP8介导的反馈调控与MAPK信号发生重编程的情境密切相关,包括肿瘤生物学以及神经炎症或神经退行性过程;因此它常被用作连接细胞外应激刺激与细胞核基因表达的关键节点进行研究。
DUSP8 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性DUSP8的表达。
DUSP8 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的DUSP8基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于DUSP8转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性DUSP8表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的DUSP8位点,并能够研究内源性位点上依赖于DUSP8的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在DUSP8表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟DUSP8通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。