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DSC2CRISPR激活质粒(h) | sc-403386-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 DSC2 基因编码桥粒连接蛋白-2(desmocollin-2),这是一种钙依赖性的桥粒型钙黏蛋白,介导细胞—细胞黏附,并有助于维持上皮屏障完整性以及相邻细胞之间的机械耦联。DSC2 通过与 plakoglobin、plakophilins 和 desmoplakin 相互作用参与桥粒的组装与稳定,将细胞连接复合体连接到中间丝,并在分化与应激过程中协调组织结构。DSC2 表达异常或桥粒重塑与黏附受损、异常的信号串扰以及与上皮病理生物学相关的细胞运动性变化有关。由于桥粒整合了结构与信号两类功能,DSC2 常用于研究细胞连接动态、细胞骨架组织以及组织稳态的模型中。
DSC2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性DSC2的表达。
DSC2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的DSC2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于DSC2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性DSC2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的DSC2位点,并能够研究内源性位点上依赖于DSC2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在DSC2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟DSC2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。