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DPYD双切口酶质粒(h) | sc-403396-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
DPYD双切口酶质粒(h2) | sc-403396-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
DPYD 编码二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidine dehydrogenase),是嘧啶分解代谢中的限速酶,可将尿嘧啶和胸腺嘧啶转化为二氢尿嘧啶和二氢胸腺嘧啶,从而把核苷酸周转与细胞内氮、碳代谢连接起来。作为一种主要的 NADPH 依赖性氧化还原酶,DPYD 的活性会影响核苷酸库的稳态,并可能与增殖细胞中的氧化还原平衡及线粒体生物能量需求相互交织。DPYD 的遗传变异或表达异常与先天性嘧啶代谢缺陷有关,也常被用于研究个体间氟嘧啶类药物代谢差异及毒性风险。DPYD 还可作为研究代谢重编程、核苷酸失衡所致应激反应以及影响 RNA/DNA 合成的通路串扰的关键节点。
DPYD 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 DPYD 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对DPYD内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏DPYD的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了DPYD基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。