Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Dnmt2双切口酶质粒(m): sc-420034-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Dnmt2 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- Dnmt2双切酶质粒（m）和Dnmt2双切酶质粒（m2）编码针对Trdmt1的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Dnmt2: sc-365001，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Dnmt2双切口酶质粒(m) | sc-420034-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
Dnmt2双切口酶质粒(m2) | sc-420034-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
Trdmt1 编码小鼠 Dnmt2 蛋白，这是一种在进化上高度保守的 RNA 胞嘧啶-5 甲基转移酶，最为人所知的功能是在特定 tRNA（包括 tRNA^Asp）上催化 m5C 修饰。这种 RNA 甲基化活性有助于维持 tRNA 稳定性、保证翻译准确性并促进细胞对压力的适应，使 Trdmt1 与 RNA 加工及蛋白稳态（proteostasis）网络相联系。Dnmt2 的功能还与小 RNA 通路的调控以及基于表观转录组（epitranscriptomic）的基因表达控制有关，并对细胞增殖和应激反应产生下游影响。在与肿瘤生物学、代谢调控和神经生物学相关的情境中，已有研究报道 TRDMT1/DNMT2 活性发生改变，因此 Trdmt1 是解析哺乳动物细胞中依赖 RNA 修饰表型的一个有用靶点。
Dnmt2 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Trdmt1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Trdmt1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Trdmt1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Trdmt1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。