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DnaJC13CRISPR激活质粒(h) | sc-411713-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
DNAJC13 编码 DnaJC13,这是一种含 J 结构域的共伴侣蛋白,参与网格蛋白介导的运输与内体回收过程,在其中帮助将蛋白质质量控制与囊泡动态相协调。该蛋白与 retromer/WASH 网络相关,并参与影响受体周转、膜蛋白回收以及内体到高尔基体转运的分选决策。通过这些作用,DNAJC13 会影响对运输缺陷较为敏感的信号稳态与蛋白质稳态(proteostasis)通路。遗传学与功能研究已将 DNAJC13 活性改变与神经退行性相关过程联系起来,包括内体-溶酶体功能紊乱以及突触蛋白处理异常。
DnaJC13 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性DNAJC13的表达。
DnaJC13 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的DNAJC13基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于DNAJC13转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性DnaJC13表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的DNAJC13位点,并能够研究内源性位点上依赖于DnaJC13的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在DNAJC13表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟DnaJC13通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。