The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
DIO3双切口酶质粒(m): sc-430733-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- DIO3 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- DIO3双切酶质粒（m）和DIO3双切酶质粒（m2）编码针对Dio3的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
DIO3双切口酶质粒(m) | sc-430733-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Dio3 基因编码 3 型甲状腺素脱碘酶（DIO3）。DIO3 是一种与内质网及质膜相关的硒酶，可通过将 T4 转化为反向 T3、将 T3 转化为 T2 来灭活甲状腺激素，从而限制局部甲状腺激素信号。DIO3 通过塑造细胞内 T3 的可用性，影响依赖甲状腺激素受体的转录程序，这些程序调控增殖、分化、代谢以及发育时序。Dio3 是位于 Dlk1–Dio3 基因座内的印记基因，在需要严格控制甲状腺激素作用的胎儿组织模式形成和神经发育过程中尤为重要。该基因座的 DIO3 活性或印记状态发生失调与内分泌稳态改变相关，并在多种研究情境中受到关注，包括发育异常以及肿瘤生物学（其中甲状腺激素信号会影响细胞状态）。
DIO3 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Dio3 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Dio3内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Dio3的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Dio3基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。