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dendrinCRISPR激活质粒(h) | sc-404856-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 DDN 基因编码 dendrin,这是一种与突触后致密物(postsynaptic density)相关的蛋白,在神经元中富集,并被认为参与组织突触信号复合体。Dendrin 参与依赖神经活动的树突棘重塑,并与细胞骨架调控及塑造突触可塑性的蛋白-蛋白相互作用有关。除中枢神经系统(CNS)外,dendrin 也在肾小球足细胞中得到研究;其定位于与裂隙隔膜相关的区室,并与影响细胞结构和应激反应的通路相关。针对 dendrin 表达或定位失调的研究涉及神经精神表型以及与肾损伤相关的过程,支持其作为研究突触完整性与滤过屏障完整性机制的靶点价值。
dendrin CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性DDN的表达。
dendrin CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的DDN基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于DDN转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性dendrin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的DDN位点,并能够研究内源性位点上依赖于dendrin的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在DDN表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟dendrin通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。