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DeltaCRISPR激活质粒(h) | sc-400790-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 DLL1 基因编码 Delta-like canonical Notch ligand 1(Delta),这是一种膜锚定配体,可与 NOTCH 受体结合,触发蛋白水解切割并释放 Notch 细胞内结构域,从而调控控制细胞命运决定的转录程序。由 DLL1 介导的 Notch 信号在胚胎模式形成、神经发生、体节形成,以及通过调控分化、增殖和侧向抑制来维持干细胞与祖细胞库方面具有核心作用。DLL1/Notch 轴活性异常与组织稳态失衡和发育障碍相关,并常在肿瘤生物学、血管生成和免疫细胞分化等异常信号背景下被研究。作为细胞表面的通路节点,DLL1 为解析邻接依赖(juxtacrine)信号传导动力学及其下游转录响应提供了一个便于操控的切入点。
Delta CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性DLL1的表达。
Delta CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的DLL1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于DLL1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Delta表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的DLL1位点,并能够研究内源性位点上依赖于Delta的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在DLL1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Delta通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。