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DDB1慢病毒激活颗粒(m) | sc-419966-LAC | 200 µl | CNY3422.00 |
小鼠 DDB1(损伤特异性 DNA 结合蛋白 1)是 CUL4–DDB1 E3 泛素连接酶复合体的核心组分,该复合体通过协调底物的泛素化来调控整个细胞周期中的蛋白质周转。DDB1 参与核苷酸切除修复以及与复制相关的 DNA 损伤应答,将染色质相关的损伤与依赖泛素的信号传导和蛋白质稳态联系起来。通过与 DCAF 底物受体的相互作用,DDB1 有助于调控染色质重塑、复制许可及检查点控制。在小鼠模型中,DDB1 依赖的泛素化及基因组维护通路的失调与致癌应激、发育表型以及神经退行性疾病相关的 DNA 修复缺陷研究密切相关。
DDB1 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Ddb1 表达。
DDB1 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Ddb1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性DDB1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Ddb1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。