cytoglobinCRISPR激活质粒(h): sc-402949-ACT

人类 CYGB 基因编码细胞珠蛋白（cytoglobin），这是一种可结合血红素的珠蛋白家族蛋白，参与细胞氧处理与氧化还原稳态维持。CYGB 被认为与一氧化氮代谢调控、限制活性氧（ROS）以及在缺氧和氧化应激条件下支持细胞生存程序有关，这些作用涉及与 HIF 信号及应激响应型转录网络相交汇的通路。已有研究报道其在多种组织与细胞类型中表达，并在不同情境下参与成纤维细胞激活、血管生物学以及细胞对代谢应激的适应。CYGB 活性或表达的失调与炎症和纤维化相关表型有关；同时也在肿瘤学研究中受到关注，因为氧与氧化还原平衡会影响细胞增殖、侵袭及治疗反应机制。

cytoglobin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CYGB的表达。

cytoglobin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CYGB基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CYGB转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性cytoglobin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CYGB位点，并能够研究内源性位点上依赖于cytoglobin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CYGB表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟cytoglobin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。