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cystatin SCRISPR激活质粒(h) | sc-416501-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
CST4 编码胱抑素 S(cystatin S),这是一种分泌型 2 型胱抑素,可作为可逆性抑制剂抑制乳头蛋白酶样半胱氨酸蛋白酶(如组织蛋白酶 cathepsins),从而帮助调控细胞外蛋白水解以及由蛋白酶驱动的信号传导。它在唾液及其他黏膜分泌物中高表达,通过调节蛋白、肽段和基质成分的降解,促进上皮表面稳态的维持。通过塑造蛋白酶与内源性抑制剂之间的平衡,胱抑素 S 会影响与炎症、屏障完整性以及黏膜界面微生物生态相关的过程。胱抑素–组织蛋白酶轴的失衡已在多种情境中被研究,包括口腔与气道炎症性疾病以及与蛋白酶相关的组织重塑,因此 CST4 也是研究蛋白水解网络机制的一个有用靶点。
cystatin S CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CST4的表达。
cystatin S CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CST4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CST4转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性cystatin S表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CST4位点,并能够研究内源性位点上依赖于cystatin S的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CST4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟cystatin S通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。