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CYPOR慢病毒激活颗粒(m) | sc-422345-LAC | 200 µl | CNY3422.00 |
小鼠 Por 基因编码细胞色素 P450 氧化还原酶(CYPOR),它是微粒体细胞色素 P450 酶的必需电子供体;这些 P450 酶负责催化外源性化合物、类固醇、脂肪酸和维甲类化合物的氧化代谢。CYPOR 将来自 NADPH 的还原当量传递给 CYP 酶,从而把细胞氧化还原平衡与内质网相关的解毒及脂质稳态通路连接起来。通过调控 CYP 依赖的生物活化与清除反应,Por 会影响氧化应激反应,以及肝脏和肝外器官的组织特异性代谢能力。因此,CYPOR 活性失调与药物—药物相互作用、内分泌与脂质信号传导紊乱,以及与 CYP 功能改变相关的代谢表型研究密切相关。
CYPOR 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Por 表达。
CYPOR 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Por转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性CYPOR表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Por 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。