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Cyp4f15CRISPR激活质粒(m) | sc-430669-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
Cyp4f15 编码一种小鼠细胞色素 P450 4F 家族单加氧酶,可催化内源性脂质的氧化代谢,包括对脂肪酸和类二十烷酸(eicosanoids)的羟基化,从而影响炎症信号传导与脂质稳态。作为一种与内质网(ER)相关的酶,Cyp4f15 参与外源化合物与脂质的生物转化网络,并与氧化还原平衡、膜脂重塑及下游免疫调节通路相交汇。CYP4F 介导的氧化过程若发生调控改变,可能影响组织对代谢应激与炎症刺激的反应,因此 Cyp4f15 可作为研究肝脏及免疫相关背景下脂质介质周转的一个有用节点。这些过程常在代谢失衡与炎症相关表型的模型中被探讨,但不意味着具有治疗效果。
Cyp4f15 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Cyp4f15的表达。
Cyp4f15 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Cyp4f15基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Cyp4f15转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Cyp4f15表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Cyp4f15位点,并能够研究内源性位点上依赖于Cyp4f15的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Cyp4f15表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Cyp4f15通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。