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CYP3A5双切口酶质粒(h) | sc-401306-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
CYP3A5双切口酶质粒(h2) | sc-401306-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
CYP3A5 编码一种细胞色素 P450 单加氧酶,可催化多种外源性化合物和内源性底物的氧化代谢,在内质网中参与 I 期生物转化。作为肝内及肝外药物代谢酶网络的一部分,CYP3A5 影响调控类固醇与脂质稳态的通路,并参与环境化学物的清除。CYP3A5 表达与活性的个体间差异是决定代谢表型的重要因素,并可在细胞与类器官模型中改变细胞对 CYP3A 底物的暴露水平。关于 CYP3A5 依赖性代谢失调的研究,涉及毒物易感性以及与疾病相关的肝功能变化和炎症相关转录程序等情境。
CYP3A5 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 CYP3A5 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对CYP3A5内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏CYP3A5的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了CYP3A5基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。