The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
cyclin E双切口酶质粒(m): sc-419512-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- cyclin E 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- cyclin E双切酶质粒（m）和cyclin E双切酶质粒（m2）编码针对Ccne1的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：cyclin E: sc-377100，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
cyclin E双切口酶质粒(m) | sc-419512-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Ccne1 编码细胞周期蛋白 E（cyclin E），它是 G1/S 期转换的核心调控因子，通过激活 CDK2 启动 DNA 复制并协调中心体复制。Cyclin E 将促有丝分裂信号与细胞周期检查点控制整合起来，通过 RB–E2F 轴和 CDK 抑制因子网络等通路影响复制起始点的激活、S 期进入以及基因组稳定性。Cyclin E 活性失调与复制压力、染色体不稳定和异常增殖相关，因此 Ccne1 常被用作研究发育及疾病相关模型中细胞周期控制的关键节点。在小鼠体系中，对 Ccne1 的扰动有助于开展增殖动力学、检查点应答和 DNA 损伤信号传导的机制分析。
cyclin E 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Ccne1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Ccne1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Ccne1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Ccne1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。