cyclin CCRISPR激活质粒(h): sc-402308-ACT

人类 CCNC 基因编码细胞周期蛋白 C（cyclin C），这是一种转录型细胞周期蛋白，可在 Mediator 激酶模块中与 CDK8 或 CDK19 形成复合体，从而精细调控依赖 RNA 聚合酶 II 的转录。通过调节对刺激作出响应的基因程序，细胞周期蛋白 C 影响细胞周期进程、代谢适应与应激信号传导，包括调控线粒体动态变化和细胞凋亡的相关通路。CCNC 的活性与 WNT/β-连环蛋白、TGF-β 以及 NF-κB 等转录网络相互交织，将 Mediator 激酶信号与发育及炎症过程联系起来。CCNC/CDK8–Mediator 功能失调与癌症及其他以基因表达调控紊乱为特征的疾病中所见的异常转录状态有关。

cyclin C CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CCNC的表达。

cyclin C CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CCNC基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CCNC转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性cyclin C表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CCNC位点，并能够研究内源性位点上依赖于cyclin C的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CCNC表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟cyclin C通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。