CTDSPL2CRISPR激活质粒(m2): sc-435953-ACT-2

小鼠Ctdspl2基因编码CTDSPL2，这是一种属于卤酸脱卤酶（HAD）家族、依赖Mg2+的磷酸酶，参与磷酸化丝氨酸/苏氨酸残基的去磷酸化，并通过调控RNA聚合酶II羧基末端结构域（CTD）磷酸化动态来实现转录控制；CTDSPL2通过调节依赖磷酸化的信号传导与基因表达程序，影响细胞周期进程、分化与谱系承诺，从而与控制染色质相关转录调控的通路相整合并连接到细胞状态转换；CTD磷酸酶活性及相关转录调控回路的失衡与肿瘤发生及发育异常表型相关，因此Ctdspl2可作为在疾病模型中解析由磷酸化驱动的转录网络的有用基因位点；在小鼠细胞中对Ctdspl2进行基因编辑可支持功能基因组学研究，用于探究CTD磷酸化调控、磷酸酶-底物关系以及与增殖和分化相关的下游转录组变化。

CTDSPL2 CRISPR激活质粒（m2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Ctdspl2的表达。

CTDSPL2 CRISPR激活质粒（m2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Ctdspl2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Ctdspl2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CTDSPL2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Ctdspl2位点，并能够研究内源性位点上依赖于CTDSPL2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Ctdspl2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CTDSPL2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。