CTCFCRISPR激活质粒(h): sc-401245-ACT

CTCF（CCCTC 结合因子）是一种锌指 DNA 结合蛋白，作为染色质结构的主调控因子，负责协调增强子–启动子通讯、转录绝缘以及基因组长程环化。CTCF 通过塑造拓扑关联结构域（TAD）并调控边界元件，影响包括基因表达程序、复制时序和 DNA 损伤应答在内的核心过程。CTCF 依赖的基因组组织一旦被破坏，往往会导致广泛的转录失调和基因组不稳定性——这些特征常在发育障碍以及癌症相关的染色质重塑研究中被重点关注。作为三维基因组结构的核心组织者，CTCF 被广泛用于表观遗传调控、谱系决定以及启动子-增强子调控等机制研究中。

CTCF CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CTCF的表达。

CTCF CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CTCF基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CTCF转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CTCF表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CTCF位点，并能够研究内源性位点上依赖于CTCF的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CTCF表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CTCF通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。