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CT45-1CRISPR激活质粒(h) | sc-416782-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
CT45A1 编码 CT45-1,这是一种癌/睾丸抗原,在正常成人组织中的表达高度受限,但在多种肿瘤背景下常发生再表达,因此可作为研究表观遗传失调和谱系不相称转录的有用标志物。尽管其确切分子功能仍未完全明确,CT45-1 已被关联到与细胞可塑性和应激适应状态相关的转录程序,包括在致癌信号作用下支持细胞增殖与生存的过程。CT45A1 的异常表达通常与肿瘤免疫原性和异质性相关,并常与其他生殖系限制性抗原一同研究,这些抗原可反映染色质状态的改变。这些特征使 CT45A1/CT45-1 成为研究耦联染色质重塑、转录调控与肿瘤相关抗原表达之调控回路的相关靶点。
CT45-1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CT45A1的表达。
CT45-1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CT45A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CT45A1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CT45-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CT45A1位点,并能够研究内源性位点上依赖于CT45-1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CT45A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CT45-1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。