CRY2CRISPR激活质粒(h): sc-403171-ACT

人类 CRY2 基因编码隐花色素 2（cryptochrome 2），这是一种对蓝光有反应的黄素蛋白，在昼夜节律的转录–翻译反馈环路中充当核心抑制因子。CRY2 通过与 PER 蛋白相互作用并调控依赖泛素的蛋白周转，来调节由 CLOCK:BMAL1 驱动的基因表达，从而塑造代谢、细胞周期时序以及激素信号传导的日节律。通过与翻译后修饰网络耦联（包括磷酸化以及由 E3 连接酶介导的蛋白质稳态调控），CRY2 影响外周组织中的多种转录程序。CRY2 活性或表达的失调与睡眠–觉醒调控改变及昼夜节律错位有关，并与代谢和神经精神表型相关，因此是开展通路导向研究的一个重要节点。

CRY2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CRY2的表达。

CRY2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CRY2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CRY2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CRY2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CRY2位点，并能够研究内源性位点上依赖于CRY2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CRY2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CRY2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。