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CRTAC1CRISPR激活质粒(h) | sc-404534-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
CRTAC1(cartilage acidic protein 1,软骨酸性蛋白1)编码一种分泌型、与细胞外基质相关的蛋白,在软骨及其他结缔组织中富集,并在其中参与细胞—基质相互作用和组织结构的组织与维持。CRTAC1 与软骨细胞分化以及基质稳态相关过程有关,这些过程与细胞黏附和细胞外基质重塑通路相互交织。已有研究报道 CRTAC1 的表达改变与肌肉骨骼系统疾病及退行性关节病相关,使其成为研究软骨生物学与结缔组织重塑的有用标志物。在体外实验中,对 CRTAC1 的调控可用于开展机制研究,涉及基质组成、细胞黏附表型以及与软骨完整性相关的转录程序等。
CRTAC1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CRTAC1的表达。
CRTAC1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CRTAC1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CRTAC1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CRTAC1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CRTAC1位点,并能够研究内源性位点上依赖于CRTAC1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CRTAC1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CRTAC1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。