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CRIK双切口酶质粒(m) | sc-419668-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
CRIK双切口酶质粒(m2) | sc-419668-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Cit 基因编码柠檬酸蛋白 Rho 相互作用激酶(CRIK),这是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,位于 RhoA 的下游,在胞质分裂过程中协调肌动蛋白细胞骨架的重塑。CRIK 定位于分裂沟与中体,在那里通过调控肌球蛋白及其他细胞骨架效应因子,支持收缩环的组织以及最终断裂(abscission)。这一作用使 Cit 与细胞周期进程、有丝分裂的准确性以及增殖区室中的组织稳态相关。CRIK 功能改变所致的胞质分裂失调与细胞骨架调控异常,与小鼠模型中关于基因组不稳定性、非整倍体以及发育表型的研究密切相关。
CRIK 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Cit 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Cit内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Cit的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Cit基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。