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CPTII双切口酶质粒(h) | sc-403401-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
CPTII双切口酶质粒(h2) | sc-403401-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
肉碱棕榈酰转移酶2(Carnitine palmitoyltransferase 2,CPT2)基因编码CPTII,它是一种位于线粒体内膜的酶,催化长链酰基肉碱重新转化为酰基辅酶A(acyl-CoA),使其得以进入β-氧化过程。该步骤是脂肪酸分解代谢的核心环节,关系到来源于脂质的乙酰辅酶A并入三羧酸(TCA)循环,以及在代谢需求高的组织中维持细胞能量稳态。CPTII活性会影响线粒体的氧化还原平衡与脂质通量,因此与调控氧化代谢和代谢应激反应的更广泛通路相联系。致病性的CPT2变异与长链脂肪酸氧化障碍相关,使CPTII成为研究能量代谢、线粒体功能以及脂质诱导细胞表型机制的重要靶点。
CPTII 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 CPT2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对CPT2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏CPT2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了CPT2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。