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CPTIICRISPR激活质粒(h) | sc-403401-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 **CPT2** 基因编码肉碱棕榈酰转移酶 II(CPTII),这是一种位于线粒体内膜的酶,催化长链酰基肉碱重新转化为酰基辅酶 A(acyl‑CoA),从而使其进入 β‑氧化循环。这一步对于线粒体脂肪酸氧化以及高能量需求组织的能量稳态至关重要,并将 CPTII 活性与生酮作用、ATP 生成及代谢应激反应联系起来。CPT2 功能异常会破坏长链脂肪酸的利用,并与脂肪酸氧化受损的先天性代谢缺陷相关,尤其在禁食、疾病或能量需求增加时更为明显。因此,CPT2 被广泛用于研究线粒体代谢、脂质处理和细胞生物能量学相关通路。
CPTII CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CPT2的表达。
CPTII CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CPT2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CPT2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CPTII表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CPT2位点,并能够研究内源性位点上依赖于CPTII的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CPT2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CPTII通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。