CPSF4CRISPR激活质粒(h): sc-403190-ACT

人类 CPSF4（切割与加尾特异性因子复合体亚基 4，cleavage and polyadenylation specificity factor subunit 4）是 CPSF 复合体的关键组成部分，负责识别 AAUAAA 多聚腺苷化信号，并协调前体 mRNA 的 3′ 端切割与 poly(A) 尾的加成。通过将转录终止与 mRNA 成熟过程耦联，CPSF4 有助于塑造转录本的稳定性、核输出以及翻译效率，从而把 RNA 加工与全局基因表达调控联系起来。CPSF4 依赖的多聚腺苷化一旦受到扰动，可能引起可变 poly(A) 位点使用的偏移并改变同工型平衡，进而对细胞周期程序、应激反应与分化等产生下游影响。3′ 端加工与多聚腺苷化图谱的失调是癌症以及其他与增殖或 RNA 代谢相关疾病中反复出现的特征，因此 CPSF4 可作为研究由 RNA 加工驱动表型的机制节点。

CPSF4 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CPSF4的表达。

CPSF4 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CPSF4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CPSF4转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CPSF4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CPSF4位点，并能够研究内源性位点上依赖于CPSF4的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CPSF4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CPSF4通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。