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CPEB2CRISPR激活质粒(h2) | sc-409367-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类CPEB2(细胞质多腺苷酸化元件结合蛋白2)是一种RNA结合蛋白,能够识别3′UTR中的细胞质多腺苷酸化元件,并以情境依赖的方式调控poly(A)尾长度、mRNA稳定性及翻译过程;通过协调基因表达的转录后调控,CPEB2可通过选择性调节靶转录本参与细胞周期推进、应激反应下的翻译重编程以及与缺氧相关的信号传导等过程;CPEB2的表达或活性发生改变与RNA代谢失衡有关,因此常在癌症生物学、神经元功能以及其他翻译调控受扰的疾病研究中受到关注;对CPEB2进行基因编辑可用于解析RNA调控网络的机制、绘制转录本特异性的翻译效应图谱,并在人体细胞模型中对由3′UTR介导的调控进行功能性探究。
CPEB2 CRISPR激活质粒(h2)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CPEB2的表达。
CPEB2 CRISPR激活质粒(h2)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CPEB2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CPEB2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CPEB2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CPEB2位点,并能够研究内源性位点上依赖于CPEB2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CPEB2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CPEB2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。