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CorinCRISPR激活质粒(h) | sc-404362-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 CORIN 基因编码 corin,这是一种 II 型跨膜丝氨酸蛋白酶,在心肌细胞中高水平表达,能够通过蛋白水解将心房利钠肽前体(pro-ANP)和脑利钠肽前体(pro-BNP)加工活化为成熟的利钠激素。通过这一利钠肽加工轴,corin 影响 cGMP 依赖性信号传导、钠和水的稳态、血管张力,以及心脏对血流动力学应激的重构反应。CORIN 的活性与细胞外蛋白水解过程及膜锚定蛋白酶的调控相互衔接,进而影响下游转录程序,从而塑造心肌肥厚与纤维化相关通路。CORIN 的遗传变异与表达改变与利钠肽信号失调及多种心血管表型相关,提示其在心脏功能机制研究和血压调控研究中具有重要意义。
Corin CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CORIN的表达。
Corin CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CORIN基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CORIN转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Corin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CORIN位点,并能够研究内源性位点上依赖于Corin的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CORIN表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Corin通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。