connexin 36CRISPR激活质粒(h): sc-402740-ACT

GJD2 编码连接蛋白36（connexin 36，Cx36），这是一种缝隙连接蛋白，可组装形成细胞间通道，使相邻细胞之间实现直接的电耦联与代谢耦联。Cx36 介导的耦联允许离子快速通量以及小分子跨膜交换，从而支持同步放电和网络振荡，尤其在神经元回路中更为重要。在中枢神经系统及其他兴奋性组织中，连接蛋白36 通过调控缝隙连接的组装与门控，影响突触整合、信号传播以及活动依赖性可塑性。GJD2/连接蛋白36 的表达或耦联发生改变已被认为与神经生理功能障碍有关，并常在涉及神经元同步性受损的疾病研究中被关注。

connexin 36 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GJD2的表达。

connexin 36 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GJD2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GJD2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性connexin 36表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GJD2位点，并能够研究内源性位点上依赖于connexin 36的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GJD2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟connexin 36通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。